术语时间分辨荧光(TRF)可与两个不同的含义一起使用:

  • 样品的荧光作为通过光脉冲发生激发后的时间的函数。为了消歧,该过程通常称为荧光寿命测量。
  • 使用具有独特荧光寿命的荧光团,以避免由具有诸多荧光寿命或其他因素(最重要的是,激发光)引起的分子引起的干扰。

讨论时微孔板读者,TRF通常指的是第二个含义。

    选择的荧光团通常是镧系元素(最常见的,铕,钐和钐)的螯合物,因为以下性质:

    • 其荧光寿命在微秒(μs)的范围内,而在大多数荧光团中,其荧光的寿命在纳秒(ns)的范围内。这允许在样品中的任何其他荧光团的荧光和样品中的任何其他荧光团的荧光完全衰减,大大减少背景后进行测量,从而提高信噪比。
    • 其激发和发射波长(Stokes'偏移)和窄发射峰之间的巨大差异有助于进一步提高信噪比。

    时间分辨荧光的应用

    基于TRF的方法的大信噪比提供了非常高的灵敏度。结果,已经开发出使用时间分辨荧光螯合物的测定的测定。使用TRF最受欢迎的测定类型是TR-FRET.测定。不同镧系元素螯合物的独特荧光寿命和光谱性能允许开发多重测定。

    Transcreener®GDPTR-FRET红色测定与Mithras²用Transcreener®GDPTR-FRER红色测定验证MITHRAS MULTMODE读卡器

    PDF.|990.0 KB.

    Transcreener®GDPTr-Fret红色测定与Tristar²S使用Transcreener®GDPTR-FRER红色测定验证Tristar²的多模微孔板读卡器

    PDF.|934.0 KB.

    CAMP / IP-ONE HTPLETHTRF®和Mithras测定使用HTRF®技术在Mithras LB 940多模微相液晶板读卡器上进行了基于CAMP / IP-ONE的基于HTPLEX单元的实验

    PDF.|686.6 KB.

    微孔板读卡器适用于TRF

    一种能够使用过滤器测量具有高灵敏度并配备闪光灯的荧光读卡器是TRF的最佳组合(也可以使用单色器的仪器,但性能较低);对于某些应用,可能需要具有扩展频谱范围的探测器(650nm以上)。下面的所有酶标器都建议用于TRF。