什么是伪病毒中和试验?

伪病毒中和试验(也称为伪类型病毒中和试验或基于伪类型的中和试验)是一种实验室方法,用于研究抗体或药物的作用,以中和病毒进入细胞的能力,从而防止感染。

假型病毒或假型病毒颗粒是嵌合“病毒”,由病毒核心(通常为慢病毒载体)由脂质包膜包围,包膜上有另一种病毒(所研究的病毒)的表面糖蛋白。通过使用不能自我复制的载体,因此不具有致病性,病毒可以在一个更安全的系统中进行研究。在SARS-CoV-2病例中,伪病毒必须表达S糖蛋白,该糖蛋白通过与人血管紧张素转换酶2 (ACE2)结合介导进入宿主细胞。除了所要研究的病毒的表面糖蛋白外,伪型病毒还含有荧光素酶基因,这种基因只在进入细胞后才表达。伪病毒进入细胞的次数越多,荧光素酶表达的次数就越多,发出的光强度也就越高。

假病毒中和测定涉及在不同浓度的兴趣抗体存在下孵育细胞和假瘤病毒,并使用a测量光发射板光度计或者多模读者。如果抗体有效地中和表面糖蛋白并阻止其进入细胞,则可以测量到光发射的显著减少。抗体效应显示使用一种抑制浓度(IC50, 我知道了80或其他)。

为什么假病毒中和试验很重要?

中和测定是学习通过疫苗接种和其他疗法引发的病毒的人和动物抗体反应的非常有价值的工具。这些测定通常需要使用野生型病毒,这限制了它们的应用,当研究的主题是诸如SARS-COV-2的高致病性人类病毒时。

然而,假型病毒中和测定中使用的复制缺陷病毒可以是安全的替代方案。伪纲病毒具有表面蛋白的构象结构,它与感兴趣的天然病毒密切相关,并且具有与感兴趣的病毒的使用相同机制和受体进入细胞的能力,但它们比病毒更安全地处理他们起源于此。

伪病毒的独特性质允许它们在生物安全级别(BSL)2实验室中安全地处理,该实验室通常与对人类造成适度健康危害的药剂。这是一个很大的优势,因为SARS-COV-2等高度致病病毒要求BSL-3实验室:虽然大多数研究机构具有BSL-2实验室,但BSL-3实验室不那么常见。

最后,由于该方法是基于发光的,因此灵敏度高,动态范围大。

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